Cargando

Utilizamos cookies propias y de terceros para ofrecer nuestros servicios, recoger información estadística e incluir publicidad. Si continúas navegando, aceptas la instalación y el uso. Si no la aceptas, puede que no te funcione correctamente la página. Puedes cambiar la configuración u obtener más información a través de nuestra Política de Cookies.

Descargar apuntes 

ESQUEMA CRIOPRESERVACIÓ

Biologia de la Reproducció - Biologia UAB

Profesor: Fany Vidal

Idioma: No especificado

Peso: 79kB

Atención: tu descarga comenzará en 10 seg.
Descarga patrocinada por Pisocompartido

Comentarios

Esto NO es el estado real de los apuntes, es una transcripción en bruto.
Vista previa:
CRIOPRESERVACIÓ DE GÀMETES I EMBRIONS 1. Efectes de la disminució de la temperatura sobre les cèl·lules Aigua intracel·lular: -Volum trencament d'orgànuls - problemes reaccions metabòliques - cristalls dany cel·lular Metabolisme: s'atura a una temperatura de entre -30 a -80 Membranes: - fluïdesa : redistribució de fosfolípids i redistribució de prot. associades (problema funcional) Citoesquelet: -els microtúbuls són molt sensibles a les Tª: a 14º o 15º despolimeritzen Factors que provoquen la Mort cel·lular durant la congelació: -formació cristalls gel intracel·lular -xoc osmòtic i increment de la concentració intracel·lular de soluts *[soluts] deshidratació cèl i volum cel·lular * punt eutèctic 2. Factors que influeixen sobre els mètodes de congelació -Tipus de cèl·lula: forma i mida, composició membrana, valor de les cèl -Tipus de contenidor: Volum gran (criotubs) -+volum = +material -fàcil manipulació -+tranquil·litat per descong. Volum petit (palletes) - ocupen poc espai en banc - ràpid congelació en bones condicions - en mateixa palleta (todo en uno) -com poc V, en canvi de Tªdescong.ràpida -ocupen més espai en banc cong. 3. Protocols de CONGELACIÓ CRIOPROTECTORS: molècules de PM PERMEABLES: -afavoreixen la deshidratació cel·lular: primer surt s'incorpora el crioprotector - estabilitzen membranes - redueixen la formació de gel - punt de congelació - punt eutèctic - toxicitat -PROH (embriones 2-8 cèl.) ; DMSO; Glicerol (difusió. Z) (alcohols) NO PERMEABLES: - Com no atravessen, fan efecte a nivell extracel. - afavoreixen la deshidratació - eviten xoc osmòtic durant la descongelació - sacarosa, glucosa, lactosa, midó (sucres) COMBINACIÓ DE PERMEABLES I NO PERMEABLES: bon sistema per deshidratació rápida i incorporació rápida de C.Permeable aigua després TAXA DE REFREDAMENT: Taxa òptima de refredament depèn de: tipus de contenidor, tipus cel·lular (V cel i composició de mb), i crioprotector que hem utilitzat trobar equilibri: Bona deshidratació, no tan lenta com per deshidratar excessivament (no puc colapsar-la), temps d'exposició al crioprotector (sobre tot cèl·lules que encara tenen metabolisme i els hi pot afectar, temps en temperatures crítiques, no exposició excessiva a concentracions de sals elevades. PROTOCOLS LENTS: fins a -60ºC Risc de sobrerefredament (supercooling) congelador bio programable solució: ice-seeding (formació de gel intracel a -40ºC) PROTOCOLS RÀPIDS:fins a -30ºC/-40ºC 4. Protocols de DESCONGELACIÓ -Augmentar temperatura -Hidratar la cèl·lula TAXA ESCALFAMENT: La taxa òptima d'escalfament depèn de: el tipus de contenidor, tipus cel·lular (V cel i composició mb) i protocol de congelació utilitzat. S'acostuma a utilitzar un protocol de descongelació ràpid -Eliminar el crioprotector Dilució del crioprotector, si a més a més crio no permeable al medi ajuda a una rehidratació més controlada i ajuda a la sortida del crio permeable -Evitar recristal·lització i xoc osmòtic mort cel·lular Si descongelem molt ràpid, el primer que es descongela es l'aigua extracel·lular, aquesta entra dins la cél·lula i trobarà cristalls que faran de nucli (origen de nucleació) per formar nou gel. 5. Mètodes de criopreservació no convencionals: VITRIFICACIÓ -VITRIFICACIÓ: Es basa en la exposició de les nostres cèl·lules a concentracions molt elevades (etilenglicol (6-8M) i sacarosa (0.5M)). Es fa una immersió directa en Nitrogen líquid (-15.000ºC/min) fins ara no s'han trobat contaminants del N líquid i té bones taxes. Es dóna una deshidratació molt ràpida i molt crio intracel·lular citosol vitri per la gran viscositat del crioprotector. -LIMITACIONS: -volums petits (20 l) -contenidors petits o oberts (el N líquid ens obliga) -rapidesa de manipulació per minimitzar la toxicitat del crioprotector a temperatura ambient. -CONTENIDORS: -raixeta microscòpica electrònica: es van col·locant en els forats 1 o 2 embrions amb poc V i els fem contactar amb el crioprotector. Es van començar a utilitzar per la seva estructura. -cryo loop: mètode de treball amb molt poc V. -cryo top: palleta que se li fa una base per posar una altre palleta -cryo tip -DESCONGELACIÓ: molt ràpida (+15.000 a +20.000ºC/min) fins a 37ºC -DILUCIÓ del crioprotector per passos a temperatura ambient: treiem el suport a Tª ambient i quan es descongela la goteta, fem canvis gota a gota de forma pausada en increments de congelació.

Los consejos tienen una finalidad meramente orientativa, sin entrar a juzgar la profesionalidad de los docentes de nuestras universidades. Los apuntes, así como el resto de contenidos que son elaborados por los usuarios de la web, en ningún caso son atribuibles a los profesores. Los nombres aparecen exclusivamente a título informativo como referencia para el usuario. Los modelos de examen de cursos anteriores son compartidos por los propios usuarios, y prentenden servir como guía orientativa de estudio para sus compañeros. Patatabrava.com no puede comprobar la veracidad y fiabilidad de todos estos contenidos académicos. En todo caso, Patatabrava.com se reserva el derecho a eliminar cualquier aportación que no cumpla las condiciones de uso en el aviso legal.

Buscador general de apuntes
Buscador general de apuntes
X
¿Problemas con la contraseña?

¿Todavía no eres de Patatabrava?

Aquesta finestra es tancarà en 3 segons

T’has apuntat correctament a aquesta assignatura. T’avisarem quan hi hagi nous continguts de la mateixa!

 

¿Seguro que quieres eliminar la etiqueta?

Esto sería un texto puesto dentro de un parrafito, explicando lo que fuera.