¡Descarga Tincion y más Apuntes en PDF de Farmacia solo en Docsity! Tema 6: Análisis coprológico microscópico tras tinción -Realización de preparaciones teñidas - permanentes - no permanentes -Métodos de tinción
Testing of Fecal Specimens Preserved in Formalin and PVA:
(*indicates special test)
7 WET MOUNT (helminths and protozoa)
SPECIMENS IN
10% FORMALIN mms “ELISA (Giardia and Cryptosporidium)
*CHROMOTROPE STAIN (microsporidia)
ST, WET MOUNT (helminths and protozoa)
*DIRECT MOUNT (epifluorescence for Cyclospora
FORMALIN-ETHYL > and Isospora)
ACETATE CONCENTRATION muaa — ACID FAST STAIN (Cryptosporidium, Cyclospora,
and Isospora)
<= *DIRECT IMMUNOFLUORESCENT ASSAY
(Giardia and Cryptosporidium)
*SAFRANIN STAIN (Cyclospora)
SPECIMENS IN
PVA FIXATIVE TRICHROME STAIN (protozoa)
HEMATOXILINA FERRICA
Esquema tomado CDC Atlanta
Tinciones permanentes: Ziehl-Neelsen Preparar el frotis y fijar con metanol 2-3 ‘ Teñir con carbol-fucsina frío durante 5-10’ Lavar con agua del grifo Decolorar con etanol-ClH al 1% hasta que éste deje de salir coloreado Aclarar con agua del grifo Tinción de contraste con verde de malaquita al 0,25% (o azul de metileno) durante 30’’ Se aclara con agua del grifo y se deja secar Observar con los objetivos 40 y 100X Identificación de ooquistes de Cryptosporidium y Cyclospora (No necesario para Isospora ni Sarcocystis) Los ooquistes aparecerán de color rosa fuerte (fuscia), con distintos grados de tinción interna,sobre un fondo de color verde pálido Algunas levaduras son también ácido-alcohol resistentes Imágenes tomadas CDC Atlanta Tricrómico Esta técnica es simple, rápida y proporciona frotis teñidos uniformemente. Método de tinción no válido para heces conservadas con formol o con MIF Las muestras conservadas con SAF se tiñen mejor con hematoxilina férrica. También para otro tipo de muestras como biopsias y raspados intestinales Recomendada para amebas y flagelados: Citoplasma: azul-verdoso o verde Núcleo, inclusiones, barras cromatoidales y flagelos: rojo o violeta Para microsporidios se usa un tricrómico modificado (la modificación consiste en usar un cromotopo 2R 10 veces más concentrado). Las esporas aparecen coloreadas en rosa-rojizo. Imágenes tomadas CDC Atlanta Técnica de la safranina (método en caliente) Fijar el frotis fecal pasando por la llama Fijar con metanol-ClH al 3% durante 3’ Lavar con agua Cubrir la preparación con safranina al 1% y dejar 1’ en ebullición. Escurrir Cubrir con azul de metileno al 1% durante 30” Lavar y dejar secar Observar con 40X y 100X Giemsa Para flagelados y microsporidios También otras muestras como biopsias y raspados de mucosa intestinal Los núcleos y otras estructuras propias del parásito se tiñen de violeta oscuro. El citoplasma en violeta más claro Extensión, secado, fijación con metanol (30’’) y tinción con Giemsa 10%, 20’. Lavado bajo el grifo, secado y observación al microscopio objetivos 40X y 100X. Preparaciones no permanentes: Coloraciones entre porta y cubre: Depositar en un porta una gota de muestra Sobre la gota de muestra colocar una pequeña gota del reactivo, tomado con una pipeta Pasteur Poner el cubre y observar al microscopio Colorante de Bailenger y Faraggi El citoplasma se colorea de rojo Las estructuras nucleares y raices flagelares en negro. Los núcleos de Dientamoeba también se colorean. M.I.F. Heces mas MIF o bien heces fijadas con MIF en un porta. En el primer caso esperar 20-30’ antes de observar al microscopio. Observación: Los quistes y trofozoitos aparecen verde-amarillento o marrones. A las horas, la mb nuclear aparece rojo oscura a negro y el citoplasma rojo. La cromatina no se colorea. Cristal violeta…….. .50 mg Fuschina básica …..10 mg Alcohol de 95º……...20 ml Agua destilada csp 100 ml
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