Histología TEMA 1, Ejercicios de Histología

¡Descarga Histología TEMA 1 y más Ejercicios en PDF de Histología solo en Docsity! HISTOLOGÍA TEMA 1 CONCEPTOS GENERALES Y MÉTODOS DE ESTUDIO: OBTENCIÓN DE LA MUESTRA PROF. DR. ÁLVARO LÓPEZ RODRÍGUEZ NINA OU AS NIVELES ESTRUCTURALES NIVEL ORGÁNICO Los órganos en general están formados por dos componentes: Parénquima: células responsables de la función típica principal del órgano Estroma: Tejido de sostén. Salvo en el sistema nervioso central es de tejido conectivo NIVELES ESTRUCTURALES NIVEL SISTÉMICO Los órganos suelen agruparse entre ellos para formar sistemas, que mantienen unas funciones más amplias concretas. Sistema nervioso Sistema cardiovascular Sistema respiratorio Sistema digestivo Sistema genitourinario Sistema endocrino sistema musculoesquelético Sistema inmune Sistema linfático NIVELES ESTRUCTURALES NIVEL SOMÁTICO El conjunto de sistemas constituyen el soma o cuerpo del indivi- duo CONCEPTOS GENERALES MATRIZ EXTRACELULAR (MEx) La producen las propias células Formada por numerosos tipos de moléculas algunas muy organizadas ( colágeno) Existe una interacción entre las células y las moléculas de la MEx Su constitución y organización es diferente en cada tejido y subtipo de tejido. CONCEPTOS GENERALES CONCEPTOS GENERALES Re En DAS E] ÑE MÉTODOS DE ESTUDIO 1.- PREPARACIÓN PARA LA MICROSCOPÍA FIJACIÓN, INCLUSIÓN Y ADHESIÓN AL PORTAOBJETOS PREPARACIÓN PARA LA MICROSCOPÍA La mayoría de los tejidos no pueden observarse directamente 1º Hay que preservarlos y mantenerlos sin deterioro (artefactos) para que las estructuras tisulares se muestren lo mas parecido a su estado en vivo FIJACIÓN: procedimiento de conservación 2º Hay que hacer cortes finos: MICROTOMOS INCLUSIÓN: procedimiento previo que facilita el corte FIJACIÓN FIJACIÓN FÍSICA 2.- FIJACIÓN POR CALOR Calentamiento en microondas (Comercial 11 a 15 mm) 45 -55ºC Puede teñirse con muchos colorantes Bueno para fijaciones rápidas (biopsias) o porque la química destruye determina- dos componentes ( Ach en SNC) Es una fijación pobre y puede complemen- tarse con química FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA Empleo de agentes químicos que detienen los fenómenos post mortem al reaccionar con las macromoléculas de los tejidos Tres tipos: Entrecruzantes Oxidantes Precipitantes FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA 1.- AGENTES ENTRECRUZANTES Producen entrelazamiento de las proteínas al formarse enlaces de hidroximetileno entre la proteína y el fijador, lo que insolubiliza las proteínas y da al tejido consistencia Formaldehído: malo para lípidos (membranas) Glutaraldehído: difícil de conservar, se degrada FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA 3.1- AGENTES PRECIPITANTES ALCOHÓLICOS Tiende a retraer los tejidos Alteran la morfología del tejido (retracción), destruyendo orgánulos membranosos (mitocondrias) Producen pocos cambios químicos por lo que preservan la reactividad y antigenicidad molecular A bajas temperaturas precipita las proteínas NO LAS DESNATURALIZA por lo que retienen las propiedades enzimaticas y biologicas No alteran los ácidos nucleicos FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA 3.2- AGENTES PRECIPITANTES ÁCIDOS El más empleado es el ácido acético al 1%-5% No fija las proteínas sino coagula los ácidos nucleicos Tiende a hinchar los tejidos pero al rehidratar vuelve a su forma natural Hace más reactivo a los Ac Nucleicos a tratamientos posteriores Se usa para: Preservar los cromosomas Precipitar la cromatina de los núcleos interfásicos Contrarrestar el efecto retractor de los alcoholicos El tricloroacético precipita proteínas en solución (no se usa solo) FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA 3.2.- AGENTES PRECIPITANTES ÁCIDOS El ácido pícrico presenta características fisicoquímicas diferentes a otros ácidos. Se usa en solución saturada al 2% (amarillo intenso) Precipita algunas proteínas al formar sales Esta reacción se revierte en medio neutro Hay que lavarlos con alcohol para quitarles el color amarillo Puede dañar los tejidos y dificultar su tinción Hidroliza los Ac. Nucleicos por lo que no puede usarse para estudios cuantitativos de DNA Es un buen fijador para morfología En estado sólido es explosivo y las manchas difíciles de quitar FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA 4.- MEZCLA DE FIJADORES 2.- Mezcla Zenker-Formol Mezcla de 9 partes de ácido acético al 4%, Cloruro de mercurio al 4% y dicromato potásico al 2% (líquido de Zenker) y una de formol Hay que eliminar el mercurio con lugol antes de teñir FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA 4.- MEZCLA DE FIJADORES 3.- Líquido de Carnoy Mezcla de 6 partes de etanol, 3 partes de cloroformo y 1 de ácido acético Buena capacidad de fijación, penetración y deshidratación. Bueno cuando urge realizar un bloque de parafina Bueno para ácidos nucleicos Produce lisis y retracción de los tejidos FIJACIÓN FIJACIÓN QUÍMICA 5.- FIJACIÓN DE LÍPIDOS Y CARBOHIDRATOS Los lípidos suelen perderse en los pasos de fijación rutinaria (paso por alcoholes) Lo mejor cortes de congelación o fijación con tetróxido de osmio esencial en ME Ácido tánico para estudio de surfactante pulmonar Para glucógeno ac. Tánico u osmio, también alcoholes FIJACIÓN DISOLVENTE OSMOLARIDAD Y TEMPERATURA La disolución suele ser tamponada entre 6 y 8. La solución se tiende a que sea algo hiperosmótica sobre todo en ME La temperatura no es importante para MO y suele hacerse a T. ambiente. En ME a 4ºC INCLUSIÓN INCLUSIÓN Tiene como finalidad facilitar cortes delgados. Para MO entre 1 y 100 micras. Habitualmente entre 3 y 5 micras Consiste en infiltrar el tejido con material que de consistencia al tejido y permita una sección homogénea El material más utilizado es la parafina, otros menos utilizados son la celiodina, resinas, gelatina, agar y poliacrilamida INCLUSIÓN A.- INCLUSIÓN EN PARAFINA La parafina es un subproducto incoloro e inodoro de la industria petriquimica mezcla de hidrocarburos Características Sólida a temperatura ambiente Punto de fusión entre 40 y 70ºC según tipo La de uso rutinario entre 54 y 58ºC Es muy importante infiltrar la parafina en el tejido (inclusión) para sustituir al agua INCLUSIÓN 2.- Descalcificación Se realiza sólo en tejidos calcificados como hueso dientes o muestras de tejido patológico calcificado Se trata de eliminar las sales de calcio para reblan- decer el tejido y poder cortarlo debe tenerse la precaución de no crear artefactos al utilizar agentes químicos muy agresivos Se utilizan dos tipos: ácidos fuertes o moléculas quelantes del Ca++ INCLUSIÓN 2.- Descalcificación Los ácidos fuertes que se utilizan son: el fórmico, el nítrico y el clorhídrico Pueden usarse mezclas mezclas ácidas como la de Jenkins que consta de: clorhídrico, acético cloroformo y alcohol. Las soluciones ácidas si se dejan tiempo afectan a las propiedades tintoriales de la muestra INCLUSIÓN 2.- Descalcificación Dentro de los agentes quelantes sule utilizarse el EDTA (ácido etiléndiaminotetracético) Estos agente afectan mucho menos a la tinción Tienen como desventaja que necesitan muchos más tiempo incluso semanas para realizar su función El volumen de líquido descalcificador debe ser al menos 20 veces mayor que la pieza y debe ser cambiado varias veces durante el proceso INCLUSIÓN 4.- Aclaramiento Es el proceso de sustitución del agente deshidratan-te por un disolvente compatible con el medio de inclusión (parafina) Si la pieza ha sido bien deshidratada el agente aclarante la vuelve traslucida si no es así se vuelve ligeramente opaco Los más usados son Xileno, tolueno cloroformo y benceno El xileno tolueno son los más rápidos y endurecen poco el tejido pero son muy volátiles, tóxicos e inflamables INCLUSIÓN 5.- Inclusión Se introduce el tejido en parafina fundida a 60º El calor evapora los agentes aclarantes que son sustituídos por la parafina Este proceso puede hacerse de forma manual o con un aparato de inclusión INCLUSIÓN 6.- Confección de bloques Se coloca la pieza impregnada en parafina en un molde pequeño lleno de parafina fundida y se deja enfriar Esto se realiza con estaciones de inclusión que constan de: Dispensador de parafina líquida Recipiente de parafina líquida Estuches de inclusión ya preparados Una placa caliente para la orientación de las piezas Placa fria para solidificación INCLUSIÓN B.- INCLUSIÓN EN RESINA 1.- Resinas acrilicas Se usan como la parafina con dos ventajas si se utilizan en MO: Se obtienen cortes más finos 1-2 micras Por su dureza se pueden utilizar para cortes de hueso sin desmineralizar INCLUSIÓN B.- INCLUSIÓN EN RESINA 1.- Resinas acrílicas Hueso en resina acrílica al ME de barrido a poco aumento y en corte de MO INCLUSIÓN B.- INCLUSIÓN EN RESINA 2.- Resinas epoxi Los compuestos epoxi son un grupo de éteres cíclicos u óxidos de alqueno (alquileno) que poseen un átomo de oxígeno unido a dos átomos de carbono adyacentes (estructura oxirano)  Hay varios tipos: INCLUSIÓN C.- OTRAS INCLUSIONES 1.- Celoidina (muy en desuso) Es una forma purificada de nitrocelulosa Se utilizan para muestras de dureza heterogé- nea ( globo ocular) o piezas duras pero frágiles Produce pocas retracciones por lo que puede usarse para tejido nervioso La inclusión tarda día o semanas y el corte es grueso. No es hidrosoluble INCLUSIÓN C.- OTRAS INCLUSIONES 1.- Gelatina, agar y poliacrilamida Son hidrosolubles por lo que no requieren des- hidratación y aclaración previas Su punto de fusión es 40º no requieren altas T. No pueden eliminarse y suelen interferir con la tinción. Se utilizan para marcajes con fluorocromo MICROTOMÍA Es la técnica mediante la que se obtienen cortes de la pieza a observar del tamaño adecuado Para MO se utilizan los microtomos Manual Deslizante De rotación (Minot) (Muestras incluidas) Criostato (Muestras congeladas) Vibratomo (Muestras frescas corte grueso) MICROTOMÍA 4.- Microtomo de rotación o de Minot MICROTOMÍA 5.- Criostato Criostato manual de bronce Criostato Leica 2800 E MICROTOMÍA 6.- Vibratomo Vibratomo Leica VT 1200 S RECOGIDA DE MUESTRAS Placa calefactora Nahita 822 EXTENSIONES Se utilizan para muestras que no requieren inclusión ni corte como son la sangre, esputos u otros fluidos Se trata de colocar las células en monocapa sobre el portaobjetos En la actualidad se realizan mediante aparatos como el citospín o ThimPrep mucho más fiable por sepa- rar las células del resto y tener preparaciones limpias EXTENSIONES Citospín Agilent 1100 HPLC