MECANISMOS DE TINCIÓN EN EL LABORATORIO DE HISTOPATOLOGÍA, Apuntes de Histología

¡Descarga MECANISMOS DE TINCIÓN EN EL LABORATORIO DE HISTOPATOLOGÍA y más Apuntes en PDF de Histología solo en Docsity! Histología. Seminarios. Estructura y Función I. 1 MECANISMOS DE TINCIÓN EN EL LABORATORIO DE HISTOPATOLOGÍA Según la naturaleza de la relación molecular entre los colorantes y los tejidos, existen tres mecanismos generales de tinción: de carácter físico, fisicoquímico o histoquímico. 1. Físicos: los colorantes se disuelven o se impregnan directamente sobre el tejido. En el caso de la disolución, el colorante es más soluble en el tejido que en el disolvente que actúa como medio de transporte, de forma que pasa de uno a otro. Por ejemplo, las tinciones para grasas. En el caso de la impregnación, el colorante, por su gran volumen molecular o por precipitar selectivamente en forma de agregados insolubles en el tejido, queda atrapado entre las células y fibras que constituyen el tejido. Por ejemplo, las tinciones argénticas para fibras reticulares. 2. Fisicoquímicos: colorante y tejido se relacionan con la formación de uniones intermoleculares, por ejemplo, entre moléculas con cargas opuestas, de manera que los colorantes de carácter ácido tiñen las estructuras básicas (eosina) y viceversa (hematoxilina). 3. Histoquímicos: debe desarrollarse una reacción química entre el colorante y la estructura a teñir, de forma que al interaccionar ambos se produce un nuevo cromógeno responsable del color obtenido. Técnicas de tinción para fibras colágenas: métodos tricrómicos Las fibras colágenas son los elementos más frecuentemente hallados en el tejido conjuntivo. Principalmente se diferencian IV tipos de fibras de colágeno. Este tipo de tinciones pone de manifiesto el colágeno tipo I (tejido conjuntivo propiamente dicho) que se encuentra entre los espacios extracelulares y estromas orgánicos. Ejemplos: -Tricrómico de Masson: tiñe de azul verdoso las fibras colágenas, reticulares, membranas basales y osteoide; de rojo el músculo y la fibrina. -Van Gieson: tiñe de rojo las fibras de colágeno y el osteoide; de amarillo el músculo, la fibrina, las fibras elásticas, las fibras reticulares y las membranas basales. Van Gieson Masson Histología. Seminarios. Estructura y Función I. 2 Técnicas de tinción para fibras elásticas. Las fibras elásticas del tejido conjuntivo se encuentran fundamentalmente en órganos dotados de especial distensibilidad (arterias elásticas, pulmones, etc.). En condiciones normales son acidófilas, pero cuando se oxidan se vuelven basófilas, condición que se emplea para teñirlas específicamente. Algunos ejemplos son: - Van Gieson para fibras elásticas: fibras elásticas de color negro. - Gallego: fibras elásticas de color fucsia. Van Gieson para fibras elásticas Gallego Técnicas de tinción para identificación de fibras reticulares Las fibras reticulares están encargadas de dar soporte al resto de células en muchos órganos: bazo, hígado, nódulos linfoides, etc. Con las tinciones de rutina, las fibras reticulares no son visibles, por lo que se suele recurrir a tinciones especiales para ponerlas de manifiesto, basadas normalmente en la reducción del nitrato de plata hasta obtener plata metálica. Ejemplos de tinciones para identificar fibras reticulares: - Impregnación argéntica de Gomori: fibras reticulares de color marrón-negro, resto de estructuras sin teñir. Impregnación argéntica Histología. Seminarios. Estructura y Función I. 5 Técnicas de tinción para la detección de microorganismos Bacterias: las tinciones de rutina permiten visualizar a las bacterias y conocer su morfología (si son cocos o bacilos). Además, podemos emplear la tinción Gram para caracterizarlas como Gram-positivas (azules oscuro) o Gram-negativas (rosa). Sin embargo, hay bacterias que no se tiñen con la tinción Gram, debido a que poseen una gruesa cápsula, son principalmente las micobacterias (bacilos ácido alcohol resistentes). Para poner de manifiesto a este tipo de bacterias se emplea la tinción Ziehl-Neelsen, que tiñe estas bacterias de color rojo sobre fondo azul. Las espiroquetas, como las Leptospiras tampoco se tiñen con la tinción de Gram, siendo la tinción de Warthin-Starry (Ag) la más empleada para ponerlas de manifiesto. - Tinción de Warthin Starry Hongos Los hongos son microorganismos vegetales que pueden causar enfermedades en determinadas condiciones (hongos patógenos). Generalmente, mediante la tinción histológica se busca ponerlos de manifiesto, más que identificar el género. Entre las tinciones más empleadas destacan: - PAS: tiñe de color magenta la pared polisacárida de los hongos. - Grocott: tiñe de color negro la pared polisacárida de los hongos, mediante el empleo de plata metanemina. Hongos: Grocott Hongos: PAS Histología. Seminarios. Estructura y Función I. 6 Técnicas de tinción empleando anticuerpos: INMUNOHISTOQUÍMICA Esta técnica se basa en el empleo de anticuerpos. Los anticuerpos son moléculas producidas por las células plasmáticas, que constituyen el estadio de diferenciación terminal de los linfocitos B del sistema inmunitario. Para que se induzca la producción de anticuerpos es necesario que el antígeno y los linfocitos B entren en contacto. La función de los anticuerpos es unirse al agente infeccioso por la región hipervariable frente al cual han sido fabricados y por el extremo contrario, región conservada, a los fagocitos, que poseen un receptor específico para reconocer a los anticuerpos. Estructura básica de un anticuerpo: región hipervariable y región conservada. Virtualmente toda molécula ajena a un determinado organismo se comporta frente a éste como un antígeno. Se pueden diferenciar dos características en un antígeno: la inmunogenicidad o capacidad que presenta una molécula para generar una respuesta inmunitaria en un organismo dado y la antigenicidad o particularidad del antígeno que hace que éste sea reconocido por un determinado anticuerpo. El proceso de inmunización es aquel en el que se inyecta al animal el antígeno en condiciones adecuadas de cantidad, sustancias acompañantes, y número de veces, que sean necesarias para conseguir una buena respuesta inmune. Los animales más comúnmente empleados son ratón, rata, conejo, cabra y gallina. Una vez obtenidos los anticuerpos, éstos se deben unir a moléculas marcadoras que permitan visualizar el lugar donde se ha producido la unión del anticuerpo con el antígeno. Estas moléculas marcadoras suelen ir unidas a otro anticuerpo (secundario) que se une al primario, dando coloración. Por tanto, la inmunohistoquímica es un método basado en reacciones inmunoenzimáticas, usando anticuerpos para detectar antígenos específicos de células tisulares. Ejemplo: deseamos marcar específicamente una determinada célula, por ejemplo los linfocitos T, en un nódulo linfático de perro. En este caso, emplearemos un anticuerpo primario que reconozca un antígeno específico de los linfocitos T de perro (anti-canine CD3): Ejemplo: queremos identificar si un grupo de células neoplásicas tienen un origen en el tejido epitelial, tejido conjuntivo o tejido muscular. Para ell anticuerpos específicos frente a cada uno de ellos: - Anti-citoqueratina: específico para marcar células - Anti-vimentina: específico para marcar células de origen (conjuntivo o muscular). - Anti-actina: específico para marcar tejido Histología Estructura y Función Nódulo linfático. IHQ con CD3, marcaje de linfocitos T. o podemos emplear epiteliales. muscular. . Seminarios. I. 7 mesenquimal